Головна мета лабораторного бактеріологічного дослідження крові — визначити, чи містить пацієнта бактерії. Підтвердити або виключити бактериемию простим переглядом проби крові під мікроскопом неможливо, так як в ній немає достатньої кількості бактерій. Замість цього можна розмножити бактерії в рідкому поживному середовищі, яка містить всі компоненти, необхідні для їх росту.
Поживна (культуральна) середовище, в яке внесено зразок крові, інкубується при температурі + 37 ° С, оптимальною для росту мікроорганізмів, до моменту, коли зростання стає видимим. Зазвичай це займає 6-18 годин, але може тривати кілька днів в разі повільно зростаючих видів. На практиці, якщо немає очевидного зростання бактерій через три дні інкубації, вважається малоймовірним, що культура, а отже, і зразок крові, доданий до культурального середовища, містить бактерії. Однак за культурою продовжують спостерігати, так як в ній можуть бути присутніми повільно зростаючі види.
Як тільки виявляють видимий ріст бактерій, культура, збагачена бактеріями, забарвлюється і досліджується під мікроскопом. Це є першим кроком в ідентифікації виду мікроорганізмів, присутніх в крові (грампозитивні або грамнегативні коки, палички і т. Д.). Більш точна ідентифікація вимагає посіву рідкої культури на щільну середу в чашці Петрі. При цьому можна бачити зростання колоній бактерій, кожна з яких є продуктом розмноження однієї бактеріальної клітини. Зразок з однієї колонії потім проводиться через ряд хімічних тестів, які дозволяють остаточно визначити вид мікроорганізму.
Виділивши і идентифицировав вид бактерій, присутніх в культурі, необхідно визначити їх чутливість до антибіотиків. Це потрібно для того, щоб з'ясувати, який з них буде найбільш ефективним проти наявного мікроорганізму.
Бактериемия і фунгемія — потенційно загрозливі для життя стани, які вимагають негайного лікування антибіотиками. Тому лікування починають, не чекаючи відповіді з лабораторії, з огляду на клінічну картину захворювання. Однак коли лабораторне висновок бактеріологічного аналізу крові отримано, особливо результати перевірки чутливості (зазвичай через 3 дня), антибіотик може бути замінений, якщо це необхідно.
Взяття зразка крові для бактеріологічного аналізу крові
Мета — помістити зразок крові пацієнта в пляшку з живильним середовищем так, щоб уникнути будь-якого бактеріального забруднення (з навколишнього середовища, з рук персоналу або з шкіри хворого).
Час взяття проби для бактеріального аналізу крові
Кров для бактеріологічного посіву потрібно взяти до початку лікування антибіотиками, так як вони можуть відстрочити або запобігти зростанню бактерій, що викличе помилково негативні результати. У хворих з періодичним підвищенням температури кров слід брати, коли температура підвищується або відразу після проходження піку температури, якщо це можливо. У цей час кількість бактерій в крові максимально.
Багато лабораторій рекомендують брати другий зразок крові для бактеріологічного аналізу не пізніше, ніж через 1 годину після першого, щоб підвищити шанси виявлення бактерій і розрізнити справжню бактериемию (бактерії будуть присутні в обох зразках) від бактеріального забруднення.
Посуд для вирощування культур крові
Кров для бактеріологічного аналізу слід збирати в спеціальні пляшки з живильним середовищем . Є кілька їх різновидів, що випускаються промисловістю. Всі вони містять рідку суміш поживних речовин, необхідних для росту бактерій.
Більшість лабораторій надає два види пляшок з культуральними середовищами для бактеріологічного посіву крові. Перша містить кисень над рідким середовищем, що необхідно для росту аеробних бактерій (яким потрібний кисень). Друга містить суміш газів без кисню для культивування анаеробних бактерій (які ростуть тільки при відсутності кисню). Зразок крові слід внести в обидві пляшки.
Необхідний обсяг крові
У пацієнта з бактеріємією може бути всього одна мікробна клітина в 1 мл крові, тому при недостатній кількості крові, внесеної в пляшку з живильним середовищем, можна отримати помилково негативні результати.
Парадоксально, але помилково негативні результати можна отримати і тоді, коли в культуральне середовище внесено занадто багато крові. Це відбувається через те, що кров продовжує надавати бактерицидну дію в культурі, якщо не розлучається в достатній мірі живильним середовищем. Потрібно шукати компроміс між занадто малим об'ємом крові, де недостатньо бактерій, і занадто великим обсягом, який може знизити ефект розведення крові культуральної середовищем. В середньому, розведення крові при бактеріальному посіві живильним середовищем у співвідношенні 1:10 є оптимальним, але необхідний обсяг (зазвичай 5-10 мл) залежить від того, яка живильне середовище використовується. Дуже важливо, щоб в кожну пляшку було внесено не менше крові, ніж вимагає місцева бактеріологічна лабораторія.
Техніка виконання бактеріологічного посіву крові
Необхідно дотримуватися асептичної техніки, щоб виключити бактеріальне забруднення культури крові. Якщо зразок взято правильно, в пляшку з живильним середовищем потрапить тільки той мікроорганізм, який знаходиться в крові пацієнта.
- Кров для бактеріологічного посіву слід брати з периферичної вени, але ніколи не використовувати для цього постійний катетер, який може бути забруднене бактеріями.
- Процедуру бакпосева потрібно проводити в стерильних рукавичках або чисто вимитими руками. Місце венепункції необхідно змастити 2% розчином йоду або іншим відповідним антисептиком. Через 1-2 хвилини йод слід видалити 70% спиртом і переконатися, що шкіра суха. Кришка пляшки з живильним середовищем, куди вносять зразок крові, теж повинна бути дезінфікована.
- Кров беруть стерильним шприцом і голкою, намагаючись не торкатися руками до місця пункції.
- Кров вносять в пляшку з культуральної середовищем через заслони її гумову пробку. Ніколи не знімайте пробку з пляшки. Це може привести до її забруднення бактеріями з навколишнього середовища.
- Якщо кров беруть відразу для виконання декількох аналізів, то спочатку заповнюють бутель з культуральної середовищем, щоб запобігти потраплянню сторонніх бактерій з іншого лабораторного посуду.
- Культура крові повинна бути забезпечена етикеткою з даними про пацієнта і разом із супровідною карткою без затримки послана в лабораторію. Якщо кров беруть, коли робота лабораторії закінчена, пляшки слід помістити в термостат при температурі + 37 ° С, щоб міг розпочатися зростання бактерій. Важливо привести в супровідній картці основні клінічні дані і відомості про терапії антибіотиками, якщо вона проводилася до взяття крові.
Лабораторне висновок про результати бактеріологічного посіву крові
Проміжні висновки при спостереженні за культурою крові зазвичай видаються щодня. Остаточну відповідь бактеріологічного посіву крові включає ідентифікацію виду бактерій, виділених з культури, поряд з відомостями про чутливості або стійкості цього виду до антибіотиків.
Результати бакпосева крові розподіляються на наступні три групи
- немає росту бактерій
- чисте зростання
- змішаний зростання
Відсутність зростання бактерій
Відсутність зростання бактерій — це нормальний результат бактеріологічного посіву крові, який отримують, якщо кров пацієнта стерильна. Перш ніж розшифровувати результат таким чином, важливо врахувати можливість, що він є хибнонегативним, т. Е. У пацієнта є бактеріємія, але її не вдалося виявити за допомогою цього тесту.
Причини помилково-негативного результату бактеріологічного посіву крові можуть бути наступні
- недостатньо крові додано в культуральне середовище
- лікування антибіотиками було розпочато до взяття крові
- інкубаційний період недостатній для зростання рідкісних медленнорастущих видів
Чисте зростання бактерій
Чисте зростання бактерій — е то означає, щоє зростання єдиного виду бактерій (Е. coli, S. aureus, S. pneumoniae і т. п.), які були виділені з культури. Отримання такого результату бактеріологічного посіву крові слід очікувати, якщо у пацієнта є сепсис. Однак приблизно в 10-20% випадків виділені бактерії відбуваються не з крові пацієнта, а потрапляють в живильне середовище внаслідок порушення правил асептики при взятті зразка крові. Так як всі види бактерій можуть бути збудниками септицемії, іноді важко вирішити, чи є чисте зростання результатом бактеріального забруднення (хибнопозитивний результат) або відображає наявність септицемії (позитивний результат).
Щоб наочно показати це, припустимо, що при посіві крові виділений S. epidermis . Цей мікроорганізм, в нормі присутній на шкірі кожного з нас, легко міг потрапити в культуральне середовище з шкіри пацієнта або з рук персоналу в процесі взяття крові. Дійсно, S. epidermis найбільш часто забруднює бактеріальну культуру крові. У той же час він є частою причиною септицемії у пацієнтів з інфікованим внутрішньовенним катетером. Він також викликає ендокардит у хворих, які перенесли операції на серці. Його виявлення може означати забруднення, але в деяких випадках може мати клінічне значення.
Саме такі бактерії, як S. epidermis, які є частиною нормальної мікрофлори людини, найчастіше забруднюють культуру крові. Чисте зростання будь-якого мікроорганізму в культурі крові більш ймовірно відображає наявність септицемії, ніж бактеріальне забруднення, якщо:
- той же мікроорганізм був виділений у пацієнта і з будь-якого іншого вогнища інфекції,
- той же мікроорганізм був виділений при повторному взятті зразка крові.
Змішаний зростання
Змішаний зростання — е той результат вказує, що з культури крові було виділено більше одного виду бактерій. Інфікування крові більш ніж одним видом бактерій трапляється рідко, хоча це і може відбуватися. Змішаний зростання бактерій при бактеріологічному посіві крові зазвичай є підтвердженням забруднення живильного середовища, особливо якщо ізольовані види бактерій відносяться до звичайних контоменантами. Розшифровка результатів бактеріологічного посіву крові може виявитися скрутною, і часто потрібна допомога експерта-мікробіолога.