Аналізи

реакція Вассермана

З 1985 р в комплекс серологічних реакцій для діагностики всіх форм сифілісу включені:

— реакція зв'язування комплементу (РСК) з кардіоліпіновим і трепонемним антигенами,

— мікрореакція преципитации з кардіоліпіновим антигеном.

Ці реакції називаються стандартними серологічними реакціями. Ізольовано реакція мікропреципітації з кардіоліпіновим антигеном використовується в якості відбіркового тесту на сифіліс.

Комплекс серологічних реакцій на сифіліс застосовують не тільки для діагностики сифілісу, але використовують для контролю ефективності лікування, обстеження осіб, які мають статевий контакт з хворим на сифіліс, хворих з анамнестичними підозрою на сифіліс, а також при профілактичних обстеженнях донорів, вагітних , хворих психіатричних і неврологічних стаціонарів, осіб, які направляються на переривання вагітності.

Реакцію імунофлюоресценції (РІФ) і реакцію іммобілізації блідих трепонем (РІБТ) застосовують як для діагностики сифілісу , так і для розпізнавання хибнопозитивних реакцій, отриманих в тестах з ліпоїдному ангігенамі.

реакцію зв'язування комплементу відкрили Борде і Жангу і 1901 році, Вассерман, Нейсер і Брик в 1906 році описали цю реакцію стосовно сифілітичної інфекції, з тих пір вона відома як реакція Вассермана — РВ. Треба відзначити, що в ряді країн, наприклад у Франції, реакцію Вассермана позначають як реакцію BW (Борде-Вассермана).

В якісної реакції зв'язування комплементу (РСК) на сифіліс беруть участь наступні інгредієнти: випробувана інактивована сироватка крові, розлучена 1: 5, антиген, розведений за титром, комплемент, розведений по робочій дозі, гемолітична система. Одночасно з дослідженням випробуваної сироватки ставлять для контролю реакції зі свідомо позитивними (4+ і 2+) і негативною сироватками крові.

Випробувана сироватка крові

Кров для дослідження беруть стерильно в кількості 8-10 мл з ліктьової вени натщесерце. У грудних дітей кров беруть з черепних або яремної вен, іноді з розрізу на п'яті. Можна брати кров через 6 годин після прийому їжі, якщо хворий не вживав великої кількості яєць і жирних продуктів. Не слід брати кров раніше 24-48 годин після вживання спиртних напоїв і жирної їжі або прийому препаратів наперстянки, при підвищеній температурі, в період інфекційних захворювань і безпосередньо після них, у жінок під час менструацій, у вагітних в останні 2 тижні перед пологами і у породіль в перші 10 днів після пологів, у новонароджених в перші 10 днів життя.

Практично не придатні для дослідження гемолізовані сироватки і сироватки хворих жовтяницею.

Кров беруть сухою стерильною голкою середнього діаметра, збирають в суху стерильну пробірку. Можна брати кров шприцом з голкою.

Узята кров відразу ж прямує в лабораторію. Якщо це неможливо, вона зберігається в холодильнику при температурі 4 ° С не більше 48 годин.

Якщо для виконання серологічних реакцій на сифіліс на місці немає умов, то в лабораторію пересилають сироватку крові, попередньо висушену на смужці целофану, вощаної або щільного паперу, або на склі. Для цього на наступний день після взяття крові з пробірки відсмоктують шприцом (сухим або промитим фізіологічним розчином натрію хлориду) 1 мл сироватки і випускають її на папір або целофан в двох місцях, по 0.5 мл в кожному. На вільному краї паперу виробляють маркування (П.І.Б. пацієнта, дату і порядковий номер). Після висихання сироватки, яка набуває вигляду жовтої склоподібної плівки, її відсилають в лабораторію.

Дослідження висушеної сироватки не може повністю замінити дослідження нативной сироватки. При постановці РСК на сифіліс з висушеної сироваткою спостерігається зниження позитивності реакцій.

Слід зазначити, що для знищення природного комплементу випробувану сироватку інактивують шляхом нагрівання на водяній бані при температурі 56-58 ° С протягом 30 хвилин.

Антигени

Вассерман в якості антигену застосовував водний екстракт печінки сифілітичного плоду, що містить велику кількість блідих трепонем. Він вважав, що реакція Вассермана строго специфічна реакція. Однак уже через рік з'ясувалося, що і спиртові екстракти паренхіматозних органів здорової людини можуть застосовуватися в якості антигену в серологічних реакціях на сифіліс. Через деякий час виявилося, що спиртові екстракти органів (серце, печінка та ін.) Здорових тварин, що використовуються в реакціях як антигени, дають результати не гірше, ніж антигени печінки сифілітичного плоду. Таким чином, всі вищевказані антигени не є специфічними трепонемную, а являють собою органні антигени,

Холестерінізірованние алкогольні екстракти з м'язів бичачого серця, тривалий час застосовувалися в якості антигену (ліпоїдного) в реакції Вассермана не є повноцінними антигенами. Вони являють собою гаптени, мають низьку чутливістю і дають відносно високий відсоток неспецифічних результатів. В останні роки ліпоїдні неспецифічні органоекстрактние антигени практично перестали застосовувати.

В даний час користуються модернізованим ліпоїдним антигеном — кардіоліпіновим антигеном, який запропонував в 1947 році Пангборн. Кардіоліпін отримали шляхом осадження барію хлоридом спиртового екстракту з бичачих сердець і подальшого фракціонування осаду барію хлориду. Кардіоліпін активний лише в поєднанні з лецитином і холестерином .

Так як складові компоненти (фосфоліпін, лецитин) кардіоліпінового антигену звільнені від баластних нейтральних жирів, цей антиген високо чутливий і досить специфічний.

липоидно антигени, не будучи повноцінними і специфічними антигенами, дають можливість визначати істинні антитіла, а лише протіволіпідние реагіни. Перші спроби приготувати з культуральних трепонем специфічний антиген для серологічної діагностики сифілісу робив Н.А. Шерешевський ще в 1909 році.

протеїнові фракцію з блідих трепонем готують екстракцією розчином калію хлориду або повторним заморожуванням і розморожуванням.

трепонемную антиген (водний трепонемний антиген, отриманий руйнуванням трепонем ультразвуком з додаванням 3% карболової кислоти) був запропонований Готі і Тернером в 1953 році. Ультраозвученний культуральний трепонемний антиген випускають ліофільно висушеним по 5 і 10 мл у флаконах. Цей антиген містить протеїновий, полісахаридних і ліпоїдний компоненти.

Чутливість ультраозвученного трепонемную антигену при пізніх формах сифілісу вища, ніж чувствічельносгь протеїнової фракції культуральних блідих трепонем. Однак останній антиген але порівняно з ультраозвученним більш специфічний.

Виготовлення антигенних препаратів з культуральних. блідих трепонем більш просто і економічно, ніж приготування антигенів з патогенних блідих трепонем (з сіфілому кроликів) Тому в РСК доцільніше використовувати антиген з культуральних блідих трепонем.

З вищевикладеного видно, що серологічні реакції зв'язування комплементу, що застосовуються для діагностики сифілісу на практиці в усі наступні роки після досвіду Вассермана, принципово відрізняються за своїми антигенів від класичної реакції Вассермана.

Однак назва « реакція Вассермана »традиційно збереглося для проведених діагностичних РСК до теперішнього часу.

Комплемент — комплексне з'єднання в основному білкових фракцій, що сприяє лізису сенсибилизированного клітинного антигену (гемолизу, бактеріоліз і т.д.). Його виявляють у свіжій сироватці крові, лімфі і тканинних рідинах людини і тварин. У нормальній спинномозковій рідині комплементу немає.

При вживанні гемолизина до баранячим еритроцитів найбільшою активністю до еритроцитів барана має комплемент морської свинки. Комплемент людини значно менш активний і для постановки реакції не використовується, а навпаки інактивується. У РСК як комплементу застосовують сироватку крові морської свинки. Комплемент використовують свіжим, консервованим (до свіжої сироватці додають 4% сухої борної кислоти і 5% натрію сульфату), ліофільно висушеним (в день постановки реакції його розчиняють в 1 мл сухого комплементу додають 1 мл ізотонічного розчину натрію хлориду).

Безпосередньо перед постановкою реакції проводять титрування комплементу, тобто визначають мінімальну кількість комплементу, що сприяє повному гемолізу доданого кількості сенсибілізованих баранячих еритроцитів.

Гемолитическая система (еритроцити, барана, гемолітична сироватка)

Індикатором в РСК, тобто показником результату дослідження, служить реакція гемолізу. У цій реакції в присутності комплементу беруть участь два компоненти: еритроцити барана і гемолітична сироватка.

У РСК використовують еритроцити барана, які, в порівнянні з еритроцитами інших тварин, не настільки тендітні і більш стійкі, що не піддаються швидкому гемолизу при відмиванні і при зберіганні в фізіологічному розчині натрію хлориду.

Гемолітичну сироватку отримують шляхом імунізації кролика еритроцитами барана. Її інактивують протягом 30 хвилин при температурі 56 ° С.

Результати РСК оцінюють в залежності від наявності або відсутності гемолізу в дослідних пробірках. Наявність гемолізу пояснюється тим, що через відсутність в випробуваної сироватці сифилитических антитіл реакція антиген-антитіло не відбувається, і весь комплемент йде на реакцію баранячі еритроцити-гемолізин. У той час як при наявності специфічних антитіл комплемент повністю йде на реакцію антиген-антитіло, що призводить до затримки гемолізу.

Максимальна позитивність реакції Вассермана позначається 4+ (різко позитивна реакція) і відповідає повної затримки гемолізу, 3+ (позитивна реакція) — відповідає значної затримки гемолізу, 2+ (слабоположітельная реакція) — часткової вдержке гемолізу, 1+ ( сумнівна реакція) — незначною вдержке гемолізу. Негативна реакція Вассермана характеризується повним гемолізом у всіх пробірках досвіду.

Якісна РСК дає тільки певне уявлення про кількість реагинов і антитіл. Позначення 4 + залишається постійним незалежно від різного максимального їх кількості.

Кількісне визначення реагинов і антитіл має значення при оцінці результатів протівосіфілітіческоголікування. Кількісний метод постановки РСК надає допомогу при диференціальної діагностики свіжого і рецидивного вторинного сифілісу, раннього і пізнього прихованого сифілісу, при виявленні неспецифічних хибнопозитивних реакцій, але цінність його в даних випадках не абсолютна. Зазвичай при свіжому вторинному сифілісі РСК буває в високому, титрі, а при рецидивному вторинному сифілісі — в низькому. Однак в деяких випадках спостерігають і зворотну залежність. Низькі титри неспецифічних хибнопозитивних реакцій відрізняють їх від специфічних реакцій. Але це не є правилом, в окремих випадках відзначається протилежне явище, відзначене дуже високі — 1: 320 і навіть 1: 5120 — титри неспецифічних серологічних реакцій при деяких захворюваннях несифілітичних етіології.

Кількісна методика постановки РСК полягає в використанні зменшується кількості досліджуваної сироватки, а в іншому методика реакції залишається звичайною. Випробувану сироватку розводять фізіологічним розчином натрію хлориду в таких пропорціях: 1: 5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1: 160, 1: 320, а при необхідності — і далі. Титром реагинов досліджуваної сироватки крові є останнє розведення, при якому спостерігається затримка гемолізу.

Похожие статьи

Додати коментар

Кнопка «Наверх»
Закрыть