Існують прямі і непрямі методи лабораторної діагностики інфекційних захворювань .
За допомогою прямих методів лабораторної діагностики в біологічному матеріалі (, і ін.) виявляються мікроорганізми, їх антигени або ДНК.
Прямі методи лабораторної діагностики інфекційних захворювань:
- бактериоскопия (мікроскопія) — виявлення збудника під мікроскопом
- пряма або непряма імунофлюоресценція антигенів — під мікроскопом видно світіння на поверхні збудника, який був попередньо оброблений спеціальними речовинами
- виявлення ДНК — метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР)
- бактеріологічний метод — виділення збудника на живильному середовищі (бактерії) або культурі клітин(Віруси).
Непрямі методи діагностики лабораторної діагностики інфекційних захворювань
Типовими непрямими методами діагностики лабораторної діагностики інфекційних захворювань є серологічні дослідження , в основі яких лежить визначення специфічних до збудника інфекції антитіл :
- ,
- ,
- .
Для порівняння якості, надійності і достовірності разлічнихметодік використовують поняття діагностичної специфічності і чутливості, об'єктивності та суб'єктивності.
Чутливість — ймовірність отримання позитивного результату дослідження при наявній хвороби (результат однаковий з істинним). Чим вище чутливість методу, тим більше шансів діагностувати хворобу з першого разу, але і їм частіше можна отримати хибнопозитивний результат у здорової людини (гіпердіагностика).
Специфічність — ймовірність отримання негативного результату при відсутності хвороби. Чим вище специфічність методу, тим частіше можна отримати ложнонегатівних результат у хворої людини (гиподиагностика). У рутинній практиці під специфічністю переважно розуміють ступінь відповідності між отриманим результатом і справжнім станом. Чим більше специфічність, тим більше впевненість в тому, що виявлений справжній, саме той показник, який досліджували, наприклад, антиген або антитіло конкретного збудника.
Висока чутливість методу дозволяє виявити хворобу, а висока специфічність — підтвердити правильність результату.
Суб'єктивність — сприйняття результатів аналізів і безпосередньо людиною, без використання аналітичного обладнання. Суб'єктивні методи дослідження (мікроскопія, неаппаратние серологічні дослідження) переважно мають два варіанти результатів — позитивний і негативний. Точність відповіді в таких випадках сильно залежить від досвідченості і знань лаборанта.
Об'єктивність — сприйняття результатів аналізів за допомогою аналітичного обладнання, наприклад ІФА-аналізатора, спектрофотометра, різних датчиків. Такі методики більш точні, результати представляються в числовому діапазоні.
Культуральний метод (вирощування бактерій на живильних середовищах — , крові) забезпечує високу специфічність аналізу, однак має ряд недоліків:
- трудомісткість
- тривалість виконання дослідження (в протягом 1-5 і більше діб)
- великі матеріальні витрати і залучення висококваліфікованих фахівців
Бактериоскопический метод (світлова мікроскопія) має низьку специфічність ічутливість в порівнянні з прямої імунофлуоресценції та ПЛР.
Імунофлюоресцентний методики (пряма імунофлюоресценції — ПІФ, непряма імунофлюоресценція — НПІФ) засновані на феномені світіння спеціального барвника при люмінесцентної мікроскопії .
Методи ПІФ і НПІФ схожі, і відрізняються тільки технікою обробки препаратів реактивами. При методі ПІФ зразок біоматеріалу обробляється міченими флюорохромом антитілами одразу, за один раз.При методі НПІФ постановка реакції проводиться в два етапи: спочатку препарат обробляють специфічними немічених антитілами, в результаті чого утворюється комплекс антиген-антитіло, з яким на другому етапі реагують мічені флюорохромом антитіла. Чутливість і специфічність цих різновидів флуоресцентного методу не відрізняються і становлять 80-95%.
Методом ПІФ передбачена діагностика , , методом НПІФ — вірусу , , , трихомоніазу та інших інфекцій.Виконання цих методик передбачає спеціальну підготовку як лікаря, який повинен правильно провести забір матеріалу так і лікаря-лаборанта, який повинен правильно виконати обробку матеріалу і оцінити результат з мінімальною суб'єктивністю.
Важливі поняття серодиагностики
Титр антитіл — напівкількісне вираз змісту неспецифічних антитіл в сироватці крові у вигляді дробу, де показана найбільша ступінь розведення досліджуваної сироватки, при якій аналіз дає позитивний результат.
Так, звичайно, використовується серія послідовних дворазових розведень, значення титру виходять кратними 2: 1: 2, 1: 4, 1: 8 … до 1: 100, 1: 200, 1: 400 і т.д. Чим більше знаменник дробу, тим вище концентрація антитіл в пробі.
Сучасна постановка імуноферментного аналізу проводиться на аналізаторах оптичної щільності проби, де замість титру використовують кількісний показник, виражений в міжнародних одиницях (MO, IU) , або одиницях ті оптичної густини (ОГ) , імуноферментних одиницях (IEU) або в нанограммах на літр .
Традиційно під титром антитіл розуміють їх кількість в сироватці крові незалежно від одиниць виміру.
Критична оптична щільність (контрольний рівень оптичної щільності) — величина, яка розраховується за спеціальними формулами виконання контрольних проб кожної тест-системи. Відповідно до значення оптичної щільності критичної визначається ступінь позитивності досліджуваних проб.
Результат дослідження вважається позитивним, якщо він перевищує значення оптичної щільності критичної на певну величину , яка залежить від виду тест-системи. Всі розрахунки ведуться в лабораторії, після чого видається значення результату — позитивний, сумнівний, негативний і цифровий показник проби. На практиці критичну оптичну щільність часто називають «нормою» і записують «N = …».
Сіра зона — це діапазон низьких концентрацій специфічних антитіл, від рівня критичної величини до позитивного результату аналізу. В сіру зону з однаковою ймовірністю можуть потрапляти як позитивні, так і негативні проби.
Результати аналізу, відповідні сірій зоні, переважно позначаються як сумнівні, і не можуть бути однозначно інтерпретовані. Тому, для уточнення результату, необхідно повторити дослідження з новим зразком сироватки, прикріплені через 1-2 тижні, або провести дообстеження за іншою методикою, зокрема ПІФ, ПЛР.